产品目录

本制品适用于从各种真菌样本中提取线粒体蛋白，提取过程简单方便，提取得到的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然蛋白构象的活性，而且绝少交叉污染。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组分。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

• 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 试剂拆封后请尽快使用完。

• 仪器准备：离心机、振荡器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒。
  
• 试剂准备：PBS缓冲液、蛋白定量试剂盒。
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 提取液准备：根据样本数量，每500μL冷的蛋白提取液B中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  
• 取100mg～500mg真菌样本，用PBS洗一次。离心收集菌体沉淀。
  
• 在菌体中加入2mL提取液A后用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。
  
• 将匀浆液在500×g离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清液在1000×g离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清液在2000×g离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在11000×g离心20分钟，弃上清，留沉淀。
  
• 在沉淀中加入100～400μL蛋白提取液B，充分混匀，在4℃条件下振荡20～30分钟，至无明显沉淀。
  
• 在4℃，14000×g条件下离心15分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌线粒体蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

• 蛋白浓度低？
  处理部分线粒体样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。真菌线粒体蛋白较少，尽可能加大真菌样品的上样量。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组分，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组分，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。